文 | 華中農(nóng)業(yè)大學 陳昌福,；武漢科研時代生物技術(shù)有限公司 周鑫軍 王曉娟 陸珍珠

草魚患細菌性敗血癥的癥狀,，主要特征是身體發(fā)黑、部分鱗片松動,、脫落,，鰭條基部有出血現(xiàn)象，部分病魚的肛門紅腫,，鰓上有大量黏液并且附有污泥,，出現(xiàn)狂游、亂竄等現(xiàn)象,。解剖病魚檢查,，可見腹腔內(nèi)有腹水，腸道內(nèi)少有食物,，腸道發(fā)紅,、腸道內(nèi)有充氣的現(xiàn)象。

對于養(yǎng)殖草魚（Ctenopharyngodon idella）的細菌性敗血癥（bacterial septicemia）,，抗生素類“國標漁藥”的治療效果越來越差,。在我國不同的水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)均屬于能引起嚴重經(jīng)濟損失的魚類病害。二氧化氯作為這款水產(chǎn)常用消毒劑,，對殺菌有很好的效果,。那么如何控制制劑濃度與活化時間，殺菌才最有效,？

二氧化氯制劑的濃度與活化時間對殺菌效果的影響 ▏二氧化氯試驗④

摘要：本試驗通過檢測對嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）的殺菌效果,，評價了二氧化氯（ClO₂）制劑配制濃度與活化時間對殺菌效果的影響。本實驗結(jié)果證明,，四川齊力綠源水處理科技有限公司生產(chǎn)的ClO₂制劑,，將配制濃度控制在8000.0mg/L、活化時間10min的條件下,，制備的ClO₂制劑溶液,，對A hydrophila顯示出了最強的殺菌效果。

關(guān)鍵詞：二氧化氯制劑,；活化方法,；致病菌；殺菌效果

為了驗證四川齊力綠源水處理科技有限公司制備的二氧化氯（ClO₂）制劑的活化濃度與時間對殺菌效果的影響,，特進行本試驗,。

01

材料與方法

1.1供試藥物

四川齊力綠源水處理科技有限公司生產(chǎn)的ClO₂制劑（批準文號：川衛(wèi)消證字2019第0001號,、生產(chǎn)日期20220416）作為本試驗中的供試藥物。

1.2供試菌株及其培養(yǎng)

從患細菌性敗血癥的草魚（Ctenopharyngodon idella）體內(nèi),，分離到的致病性嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）菌株作本試驗的供試菌株,。將冷凍保存菌株接種在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基（BHIA，Difco）上,，28℃培養(yǎng)24 h,，以滅菌生理鹽水洗下菌苔，離心集菌,，并用滅菌生理鹽水將濃度調(diào)節(jié)為1×10⁷cfu/mL,，低溫保存?zhèn)溆谩?/span>

1.3ClO₂制劑的配制方法

在配制ClO₂制劑溶液前打開包裝袋，從同一個包裝袋中準確稱取ClO₂制劑若干,，分別溶解于3個盛有100.0mL蒸餾水的玻璃燒杯中,，輕輕攪動使ClO₂制劑充分溶解，制備成終濃度為2000.0mg/L,、4000.0mg/L和8000.0mg/L的3個不同濃度的ClO₂制劑供試原液,。

自ClO₂制劑加入蒸餾水中開始計時，于活化10min,、20min和30min后,，分別從不同濃度的ClO₂制劑供試原液中，定量取樣做殺菌試驗,。

1.4 殺菌處理

從位于武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)的孟斌魚苗孵化場蓄水池取水（圖1）,。將取回的池水在每個容量為250.0mL的三角玻璃燒杯中，分別盛裝100.0mL的滅菌池塘水（圖2）,。

圖1示從水產(chǎn)養(yǎng)殖場蓄水池中養(yǎng)殖池水的情景

圖2示將養(yǎng)殖池塘水定量分裝在三角玻璃燒杯中的情景

經(jīng)過高壓滅菌后（圖3）,，將其移出高壓滅菌鍋并置于超凈工作臺上（圖4），在無菌條件下,，向每個三角玻璃燒瓶中添加1.0 mL菌濃度約為1×10⁷cfu/mL的A.hydrophila活菌液（圖5）,，輕輕搖動三角玻璃燒瓶，使菌液在三角玻璃燒杯瓶中分布均勻,。

圖3示將養(yǎng)殖池水經(jīng)過高壓滅菌的情景

圖4示將滅菌后的三角玻璃燒瓶中置于超凈工作臺中的情景

分別從不同濃度的ClO₂制劑原液中定時、定量取樣,，添加在盛有100.0mL滅菌池塘水的三角玻璃燒瓶中,，使水體中的ClO₂制劑的終濃度分別達到0.10mg/L，0.30mg/L,，0.60mg/L和0.90mg/L,。輕搖動添加ClO2制劑原液后的三角玻璃燒瓶，使菌體和藥液均勻地分布在水中,。另外設置添加菌液但不添加ClO₂制劑原液的三角燒瓶作為對照組,。添加藥液結(jié)束40 min后,，檢測不同濃度ClO₂制劑的殺菌效果。

圖5示向盛有滅菌池水的三角玻璃燒杯中定量添加致病菌的情景

1.5 殺菌效果的檢測

在無菌條件下,，從各三角玻璃燒瓶中取0.10mL水,，塗抹在用BHIA制備的平板上，在28℃條件下培養(yǎng)48 h后,，通過計數(shù)各平皿中的菌落數(shù)量,，根據(jù)菌落的生成狀況，判斷ClO₂制劑的殺菌菌效果,。

02

結(jié)果

采用不同的濃度與活化時間制備的ClO₂制劑溶液,，對A.hydrophila殺菌效果的影響見圖6。由圖6所示結(jié)果可以看出,，在配制ClO₂制劑溶液時,，濃度與活化時間均對配制ClO₂制劑溶液的殺菌效果有影響的。在本試驗中,，在ClO₂制劑溶液起始濃度為8000.0mg/L以內(nèi),，配制濃度越大，殺菌效果越好,。而將ClO₂制劑添加在水體中后的活化時間,，在這次試驗中控制的3個活化時間，以將活化時間控制在10min的ClO₂制劑溶液殺菌效果最好,。

圖6 配制ClO₂制劑的濃度與活化時間對殺菌效果的影響

03

討論

眾所周知,，ClO₂是一種黃綠色到橙黃色的氣體，是國際上公認為安全,、無毒的綠色消毒劑,。ClO₂常態(tài)為氣態(tài)，沸點11℃,。當濃度很高時呈紅黃色,，低濃度時呈黃綠色，是一種具有強烈刺激性臭味的氣體,，有類似氯氣和硝酸的特殊刺激臭味,。在-59℃時凝固成橙紅色晶體。

ClO₂能與許多化學物質(zhì)發(fā)生爆炸性反應,。尤其是對熱,、震動、撞擊和摩擦相當敏感,，極易分解發(fā)生爆炸,。受熱和受光照或遇有機物等能促進氧化作用的物質(zhì)時，能促進分解并易引起爆炸,。氣相濃度超過10%則會發(fā)生爆炸,，若用空氣,、二氧化碳、氮氣等惰性氣體稀釋時,，爆炸性則會有所降低,。正是因為ClO2具有這些特點，自人類發(fā)現(xiàn)ClO₂后的較長時間內(nèi),，并沒有將其作為商品開發(fā)應用,。而之所以沒有作為商品開發(fā)應用，主要是因為ClO₂不能作為直接運輸?shù)纳唐?，迄今為止,，也只能將其制備?span style="color: rgb(0, 0, 0);font-size: 16px;caret-color: rgba(0, 0, 0, 0);letter-spacing: 0.54px;background-color: rgb(255, 255, 255);text-align: center;font-family: 宋體;">ClO₂制劑的商品形式，需要應用時將其在現(xiàn)場發(fā)生后再使用,。

現(xiàn)在我國水產(chǎn)養(yǎng)殖用投入品市場上,，用作水產(chǎn)用消毒劑的ClO₂制劑有很多，由于制售ClO₂制劑的企業(yè),，可能是采用不同的配方制備的ClO₂制劑,，因此，在我們利用從水產(chǎn)養(yǎng)殖用投入品市場上,，隨機采購的多種ClO₂制劑完成的殺菌試驗結(jié)果證明,，市售各種ClO₂制劑對水產(chǎn)動物致病菌的殺菌效果是存在巨大差異的。而本試驗結(jié)果證明了,，即使是同一種ClO₂制劑,，配制時的濃度以及活化時間不同，配制而成的ClO₂制劑溶液殺菌效果也是存在明顯差異的,。本試驗結(jié)果對ClO₂制劑制售企業(yè)給予的提示,，ClO₂制劑制售企業(yè)在向市場推出ClO₂制劑之前，有必要完成ClO₂制劑配制濃度,、活化時間與殺菌效果相關(guān)性試驗,，并且根據(jù)效果試驗結(jié)果，在其產(chǎn)品說明書中詳細地寫出該產(chǎn)品的使用方法,。