文/華中農(nóng)業(yè)大學 陳昌福,，武漢科研時代生物技術有限公司 周鑫軍
細菌耐藥性問題,，已經(jīng)成為危及21世紀人類身體健康的嚴重威脅。我國與世界各國政府機構均在為遏制細菌的耐藥性快速蔓延,，制定各種管控措施與策略。我國衛(wèi)生部聯(lián)合國家多個部委機構,，已經(jīng)連續(xù)2次發(fā)布了遏制微生物耐藥性的國家行動計劃,，我國的農(nóng)業(yè)農(nóng)村部也為遏制動物源性細菌耐藥性問題發(fā)布了多次公告。
然而,，現(xiàn)在細菌耐藥性快速蔓延問題以及多重耐藥性越來越嚴重的趨勢并未得到緩解,。尤其是在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，由于長期以來,，人們事實上對抗微生物藥物等“國標漁藥”的存在濫用的問題,，已經(jīng)導致水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌產(chǎn)生了極強的耐藥性。現(xiàn)在一旦水產(chǎn)養(yǎng)殖動物暴發(fā)細菌性疾病后,，使用任何一種抗微生物藥物的“國標漁藥”,，幾乎都已經(jīng)控制不止細菌性疾病的危害了。更為嚴峻的問題是,，細菌產(chǎn)生的耐藥因子（R+）是可以在各種細菌之間相互傳遞的,，也就是說危害水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病菌產(chǎn)生的R+，也是可能將其耐藥性傳遞給危害人類健康的致病性細菌,，而導致危害人類健康的致病性細菌也產(chǎn)生相應的抗藥性的,。因此,，如果控制不了水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌產(chǎn)生耐藥性，僅僅控制危害人類健康的致病性細菌耐藥性的產(chǎn)生與蔓延,，也是難以完成好“遏制細菌耐藥性的國家行動計劃”的,。要實現(xiàn)遏制水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌耐藥性快速蔓延的趨勢，必須有更多的人參與到這個工作中來,。為此,，我們在本文中提出了“中心實驗室+采樣實驗室”的設想模式，目的是為了讓監(jiān)測致病性細菌耐藥性變化的工作,，更廣泛地普及與推廣,，為遏制細菌耐藥性快速蔓延問題，做出水產(chǎn)養(yǎng)殖人的努力,，為實現(xiàn)“國家行動計劃”做出一份實實在在的貢獻,！
在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中藥敏實驗
為什么難以推廣應用？
摘要：對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病生物完成藥敏實驗檢測,，是實現(xiàn)對患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動物科學,、精準和減量用藥的唯一途徑和有效的“抓手”。多年來,，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部一再強調(diào)要加強對動物源性致病菌耐藥性實施檢測與防控工作,，但是，至今收效甚微,。本文內(nèi)容對我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中推廣致病性細菌藥敏實驗遭遇困難的現(xiàn)狀進行了初步分析,，并且對存在的部分困難提出了“中心實驗室+采樣實驗室”的對策。旨在將這種有助于控制細菌耐藥性發(fā)展的技術推廣落實到實處,，為我國的科學,、精準和減量使用水產(chǎn)用獸藥做出貢獻。
關鍵詞：水產(chǎn)養(yǎng)殖,；國標漁藥,；藥敏實驗；抗微生物藥物,；殺蟲劑由各種致病性細菌導致的細菌性病害,，每年都給我國水產(chǎn)養(yǎng)殖動物造成嚴重的經(jīng)濟損失。從患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動物體內(nèi)完成病原菌分離,、鑒定和藥物敏感性實驗,，已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病害研究中的一項常規(guī)性工作內(nèi)容。迄今為止世界各國對水生動物致病菌耐藥性監(jiān)測工作,，已經(jīng)建立了一套藥敏實驗標準化方法,，如美國國家臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）、歐洲抗菌藥物敏感試驗委員會（EUCAST-ESCMID）等，已經(jīng)頒布了一系列關于如何對致病性細菌完成藥敏實驗標準,。
為了應對細菌耐藥問題對21世紀的人類帶來的挑戰(zhàn),，遏制細菌耐藥發(fā)展與蔓延，維護全人類的健康,。我國國家衛(wèi)生計生委聯(lián)合國家發(fā)展改革委等部門,，于2016年8月聯(lián)合制定了《遏制細菌耐藥國家行動計劃（2016-2020年）》。經(jīng)過幾年的實施,，發(fā)現(xiàn)一些常見病原菌耐藥問題仍在不斷加劇,，我國面臨的細菌耐藥形勢依然很嚴峻。于2022年10月,，我國國家衛(wèi)生計生委聯(lián)合國家發(fā)展改革委等部門,，于2022年10月，再次聯(lián)合制定了《遏制微生物耐藥國家行動計劃（2022~2025）》,。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部為了響應《遏制微生物耐藥國家行動計劃（2022~2025）》,，也提出了遏制動物源性細菌耐藥性計劃。從2015年開始,，本文作者開始參加由全國水產(chǎn)技術推廣總站具體實施的“水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病菌耐藥性監(jiān)測”工作,，主要由各省的水產(chǎn)技術推廣站作為具體實施單位。由于我國對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌的藥敏實驗工作沒有做好,，直接導致農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出的科學,、精準和減量用藥的號召無法落到實處，廣大的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者也只能被迫盲目地使用一些“國標漁藥”,，直接導致了大量“國標漁藥”不能有效治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動物疾病的現(xiàn)實問題,。更為嚴峻的問題是，由于細菌產(chǎn)生的耐藥因子（R+）是可以在不同種類的細菌間相互傳遞的,，因此,，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中濫用藥物,，導致水生動物致病性細菌產(chǎn)生的耐藥性,，最終也會傳遞給危害人類的致病性細菌，而最終危害到人類的健康,。在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中藥敏實驗為什么難以推廣應用,？在這篇小文章中，我們試圖從藥敏實驗操作技術層面,，給與如下分析,。1.規(guī)范的藥敏實驗技術標準復雜、操作人員難以掌握與正確判斷結果對水生動物病原菌藥敏實驗標準方法,，已經(jīng)被眾多國際相關機構高度關注,。譬如在歐盟資助下成立的水生動物工作組，于1998年11月就起草了一份魚類病原菌藥敏實驗標準參考方法，該方法雖然其主要內(nèi)容參照了美國臨床實驗室標準化委員會（National committee for clinical laboratory,，NCCLS）制定的M31-T（1997）的標準,，但是，其中尚存在部分有待解決的問題,，例如未規(guī)定質控菌株的質控限及敏感限等關鍵因子,，僅對試驗的操作方法作了規(guī)范。稍后,，NCCLS在其獸醫(yī)抗菌藥物敏感試驗委員會下設立了水產(chǎn)工作組（VAST-AWG）,，在Alderman等人的工作基礎上，于2003年頒布了一份關于水產(chǎn)第一類型病原菌紙片瓊脂擴散法敏感試驗標準方法報告（M42-R）,，對質控菌株滅鮭氣單胞菌Aeromonas salmonicida subsp.salmonicida（ATCC 33658）和大腸桿菌Escherichia coli（ATCC 25922）的質控限作了規(guī)范,。但是，也未涉及到病原菌對不同藥物的敏感限,，對最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentrations,，MIC）測定的標準方法NCCLS還在制訂之中。日本動物抗菌藥物協(xié)會（JSAA）M IC測定方法標準化委員會2003年依國際獸疫局（OIE）2000年關于動物病原菌耐藥性和檢測指導方案,，及NCCLS動物病原菌藥敏實驗標準（M31-A2 2002）,，對1997年版的MIC測定標準做了修訂，其中包括了部分危害養(yǎng)殖魚類的病原菌,。在我國的一些一線基層實驗室,，無法獲得這些標準的質控菌株，對規(guī)范的藥敏實驗方法與技術的熟練掌握,，客觀尚存在著困難,。
2.關于全國范圍內(nèi)推進藥敏實驗的設想：中心試驗室+采樣實驗室我國是名副其實的水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，要在全國范圍內(nèi)推進對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌的藥物敏感性實驗檢測技術,，指導廣大的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者真正實現(xiàn)科學,、精準和減量使用水產(chǎn)用獸藥，就需要大量的實驗室和操作人員參與,。在短時間內(nèi),，要讓所有的實驗室均能滿足完成對致病性細菌藥物敏感性檢測的試驗條件，配備熟悉藥敏實驗技術操作,、準確判讀藥敏實驗結果并根據(jù)藥敏實驗結果,，指導水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者科學、精準地使用水產(chǎn)用獸藥的藥敏實驗操作人員,，的確是具有一定難度的,。因此，為了確保對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌藥物敏感性檢測結果的準確性,，并能根據(jù)藥敏實驗結果,，實施科學、精準地使用水產(chǎn)用獸藥，我們設想在全國范圍內(nèi)設置“中心實驗室+采樣實驗室”的模式,，推進我國對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌藥敏實驗技術的應用,。
我們設想的具體做法是，動員全國范圍內(nèi)水產(chǎn)用獸藥經(jīng)銷商,，經(jīng)過短時間技術培訓,，學會從患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動物體內(nèi)初分離致病性細菌的操作技術。將在超凈工作臺內(nèi)解剖患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動物,，并分離致病性細菌接種在盛有培養(yǎng)基的平皿中后,，直接將接種了致病性細菌的培養(yǎng)皿密封快遞給就近的中心實驗室，同時將該經(jīng)銷商銷售的所有水產(chǎn)用國標獸藥樣品也一同寄往中心試驗室,，作為藥敏試驗的備選藥物,。中心實驗室接收到來自采樣實驗室的培養(yǎng)皿后，首先檢查培養(yǎng)皿是否受到污染,，如果沒有被污染的話,，就從初分離培養(yǎng)皿中挑選單個菌落，實施純分離并完成擴大培養(yǎng)分離菌株的工作,。然后利用已經(jīng)純化的分離菌株完成對備選藥物的藥物敏感性實驗,，將獲得的藥敏實驗結果及時地報告給采樣實驗室，直接指導水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者科學,、精準地使用水產(chǎn)用獸藥,。經(jīng)過一段時間后，由中心實驗室整理來自全國采樣實驗室獲得分離致病性細菌的藥敏實驗結果,，探索我國水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌耐藥性的變化狀況并整理成實驗報告,，在有必要的前提下，提供給主管部門,。我們認為只有利用“中心實驗室+采樣實驗室”的這種模式,，才有可能克服我國在推進水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌耐藥性監(jiān)測中的問題，達成利用監(jiān)測到的水產(chǎn)養(yǎng)殖動物致病性細菌耐藥性變化結果,，指導廣大水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者實現(xiàn)科學,、精準使用水產(chǎn)用獸藥的目標。“中心實驗室+采樣實驗室”模式,，不僅僅可以解決現(xiàn)階段實驗操作人員缺乏的問題,，還能大幅減少實驗室重復建設費用及實驗耗材的后續(xù)處理難度,，還能促進水產(chǎn)動保生產(chǎn)企業(yè)不斷提高相關產(chǎn)品質量,。本文版權屬于南方農(nóng)村報 、農(nóng)財寶典 大國漁業(yè),，未經(jīng)授權,，謝絕轉載。
作者：華中農(nóng)業(yè)大學 陳昌福 武漢科研時代生物技術有限公司 周鑫軍。
編輯：鄭燕云
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